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  •   天欣泰对急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF的影响    3星级
    天欣泰对急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF的影响
      吉林华康药业天欣泰血栓心脉宁片       更新时间:2012-10-19
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    天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆GMP-140vWF的影响
    崔黎明1,张晓天1,胡亚1,王槐栋1,王放1*
    (1.吉林大学白求恩医学院,吉林 长春130021)
     
    摘要:目的 观察天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆ɑ颗粒膜蛋白(GMP-140)及血管性血友病因子(vWF)的影响。方法 采用两次注射肾上腺素加冰水浴的方法建立急性血瘀大鼠模型,观察天欣泰血栓心脉宁片对大鼠血浆GMP-140及vWF的影响。结果 天欣泰血栓心脉宁片高、中、低剂量组均可显著降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量,以中剂量组效果最为明显,与脑心通胶囊具有相似的作用。结论 天欣泰血栓心脉宁片具有降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量的作用。
    关键词天欣泰血栓心脉宁片;急性血瘀大鼠;GMP-140;vWF
     
     Study of Xueshuan Xinmaining Tablets′s effects on expression of GMP-140 and vWF on Acute Blood-Stasis Model Rats
     
    CUI Li-ming1, ZHANG Xiao-tian 1, HU Ya1, WANG Huai-dong1, WANG Fang1*
    (1. Department of Pathogenobiology, Norman Bethune Medical College, Jilin university, changchun 130021)
     
    Abstract: Objective  To observe the effects of Xueshuan Xinmaining tablets on expression of GMP-140 and vWF on acute blood stasis rats. Methods  The acute blood-stasis model rats were made by being soaked in ice water after being injected adrenaline hydrochloride. The influence of Xueshuan Xinmaining tablets on expression of GMP-140 and vWF in the model rats were observed. Results  Three groups of the Xueshuan Xinmaining tablets could markedly reduce the GMP-140 and vWF of acute blood-stasis rats. Among of three groups, the medium group's effect is the best, and it is similar to Buchang Naoxintong group. Conclusions   Xueshuan Xinmaining tablets can reduce the GMP-140 and vWF of acute blood-stasis rats.
    Keywords:  Xueshuan Xinmaining tablets, Acute blood stasis, GMP-140, vWF

    *通讯作者:王放,副教授,E-mail: wf@jlu.edu.cn
    天欣泰血栓心脉宁片是纯中药制剂,主要由川芎、丹参、水蛭、毛冬青、牛黄、麝香、槐花、人参茎叶皂苷、冰片、蟾酥等组成。具有活血化瘀,扩张血管,抑制血小板、红细胞聚集,降低血黏度,降低血脂,改善局部和全身的血液循环及防治血栓的功效[1],临床主治脑血栓、冠心病、心绞痛等血瘀证者[2]。本实验通过观察天欣泰血栓心脉宁片对大鼠血浆GMP-140及vWF的影响,进一步探讨天欣泰血栓心脉宁片的作用机理,为其临床应用和推广提供更坚实的理论基础。

     
    1试验材料与仪器
    1.1 动物
    Wistar大鼠60只,雌、雄各半,体重200g-220g,由吉林大学基础医学院试验动物中心提供,质量合格证号:SCXK-(吉)2009-0001。
    1.2 药品
    天欣泰血栓心脉宁片,由吉林华康药业股份有限公司提供,国药准字Z20030145,产品批号:110601;脑心通胶囊,陕西步长制药有限公司,国药准字Z2025001,产品批号:110764。
    1.3 主要试剂和仪器
    盐酸肾上腺素注射液,上海禾丰制药有限公司出品,批号:110302;大鼠(Rat)血浆ɑ颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒,购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒,批号:20110701A;大鼠(Rat)血管性血友病因子(vWF)ELISA检测试剂盒,购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒,批号:20110701A ;TDL80-2B飞鸽牌离心机,哈尔滨东联电子技术开发有限公司;瑞士帝肯TECAN SUNRISE 酶标仪,早稻田(北京)生物科技发展有限公司。
    试验方法
    2.1动物分组与给药
    天欣泰血栓心脉宁片,配成浓度为3.5%(g/v)、7.0%(g/v)、14.0%(g/v)高、中、低3个剂量的供试药液;脑心通胶囊,配成浓度为8.0%(g/v)的阳性对照药液;肾上腺素,配成浓度为0.1%的溶液;水合氯醛,配成浓度为10%的溶液。
    自试验动物中心引入Wistar大鼠后,适应性饲养一周,室温22℃-25℃,湿度40%-60%。将大鼠按体重随机分为6组,每组10只,雌、雄各组均分,分组为:正常对照组、血瘀模型组、天欣泰血栓心脉宁片高剂量组1.40 g/kg、中剂量组0.70 g/kg、低剂量组0.35 g/kg,脑心通胶囊阳性对照组0.80 g/kg。
    试验过程中正常对照组正常饲养,血瘀模型组给水10 mL/kg,各给药组均给予10 mL/kg供试药液。每日上午9时灌胃给药,连续给药7天。
    2.2血瘀模型的制备
    第6天灌胃给药后30 min,除正常对照组外,其余各组动物均皮下注射0.1%肾上腺素0.8 ml/kg,2 h后于冰水中浸泡5 min,再过2h后给予同剂量的肾上腺素以复制急性血瘀模型[3]
    2.3 血浆GMP-140含量的测定
    大鼠复制急性血瘀模型后,禁食不禁水12 h,第7天末次给药30 min后,腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉,腹主动脉取血[4],置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min,吸取上层血浆按照大鼠血浆ɑ颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒说明书进行操作,测定大鼠血浆GMP-140含量。
    2.4 血浆vWF含量的测定
    大鼠复制急性血瘀模型后,禁食不禁水12 h,第7天末次给药30 min后,大鼠腹腔注射10% 水合氯醛3 ml/kg 麻醉,腹主动脉取血,置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min,吸取上层血浆,按照大鼠(Rat)血管性血友病因子(vWF)ELISA检测试剂盒说明书进行操作,测定大鼠血浆vWF含量。
    2.5统计方法
    应用GraphPad Prism 5.0统计软件进行数据处理,实验数据以 ±s表示,两组间比较采用t检验进行统计分析。
    3 试验结果
    3.1 血浆GMP-140含量的影响 
    天欣泰血栓心脉宁片及脑心通胶囊对急性血瘀大鼠血浆GMP-140含量的影响见表1。结果表明:
    急性血瘀模型组与正常对照组比较,其血浆GMP-140含量明显增加(P<0.01),表明大鼠急性血瘀模型造模成功。
    与急性血瘀模型组比较,天欣泰血栓心脉宁片低剂量组0.35 g/kg、中剂量组0.70 g/kg和高剂量组1.40 g/kg组可使血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量显著降低(P<0.01),表明天欣泰血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量的作用。
    与急性血瘀模型组比较,步长脑心通组0.80 g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量显著降低(P<0.01)。
    3.2血浆vWF含量的影响 
    天欣泰血栓心脉宁片及脑心通胶囊对急性血瘀大鼠血浆vWF含量的影响见表1。结果表明:
    与正常对照组比较,急性血瘀模型组的大鼠血浆vWF含量明显增加(P<0.01),说明大鼠急性血瘀模型造模成功。
    与急性血瘀模型组比较,天欣泰血栓心脉宁片高剂量组1.40 g/kg和中剂量组0.70 g/kg可使血瘀模型大鼠大鼠血浆vWF含量显著降低(P<0.01),低剂量组0.35 g/kg可使血瘀模型大鼠大鼠血浆vWF含量明显降低(P<0.05),表明天欣泰血栓心脉宁片有明显降低急性血瘀模型大鼠血浆vWF含量的作用。
    与急性血瘀模型组比较,脑心通胶囊组0.80g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆vWF含量明显降低(P<0.01)。
     
    1          天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆GMP-140vWF的影响                ±sn=10
    组别
    正常对照组
    模型组
    低剂量组
    中剂量组
    高剂量组
    阳性对组
    剂量
    -
    -
    0.35 g/kg
    0.70 g/kg
    1.40 g/kg
    0.80 g/kg
    GMP-140(ng/mL)
    1.4±0.2**
    2.4±0.5
    1.6±0.5**
    1.1±0.3**
    1.6±0.4**
    0.7±0.3**
    vWF (pg/mL)
    950±67**
    1203±166
    1074±54*
    886±173**
    931±89**
    901±98**
    注:与模型组比较, *P<0.05, **P < 0.01.
                                    
    4 讨论
    中医辨证为血瘀证者其临床表现主要为疼痛、肿块、瘀斑、气虚等症候。祖国医学认为,血瘀证是由于血液瘀滞、运行不畅而产生的病理症候[56]。本实验给大鼠皮下注射大剂量肾上腺素模拟暴怒时的机体状态, 以冰水浸泡法模拟外寒侵袭,在两种因素综合作用下复制大鼠急性血瘀证模型, 此模型使外周血管强烈收缩,心脏后负荷增加,心肌耗氧量增加,心功能逐渐下降,使血液运行障碍[7],因此,该模型常用于中医血瘀证及活血化瘀药的研究[89]。王宏等[10]通过此模型证实天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血液黏度、血小板聚集及血液流变学的异常变化有明显改善作用;何小溪等[11]通过此模型证实人参Rb组皂苷对急性血瘀模型大鼠血液粘度、血小板聚集及血液流变学的异常变化有明显改善作用;此类研究表明,肾上腺素加冰水以复制急性血瘀动物模型的方法可行。
    GMP-140 是血小板α颗粒膜蛋白,是一种分子量为14000 的粘附蛋白, 富含有半胱氨酸, 高度糖化的整合蛋白质。GMP-140位于静止血小板颗粒膜上, 当血小板受刺激活化时随α颗粒内容物的释放而与质膜融合, 能持久存在于活化血小板质膜表面, 具有介导活化血小板或内皮细胞与多种不同类型白细胞相互粘附的功能[12]。GMP-140只有在活化的血小板表面表达,并可释放至血浆中[13],可促进单核细胞的识别,参与炎症与血栓形成,是目前最具特异性血小板活化的分子标志物[14], 血浆中GMP-140含量变化能反映体内循环系统血小板活化程度。本实验测得正常对照组与血瘀模型组血浆GMP-140含量具有显著差异,说明实验动物造模成功。与血瘀模型组比较,天欣泰血栓心脉宁片低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量明显减低,其中以中剂量组效果最为明显,与阳性对照组具有相似的效果。说明天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀有良好的防治作用。因中药的药物浓度与药物疗效不一定成线性关系,当超过一定量的最佳药物浓度后,再增加药物浓度时,药物疗效未必随之增加。所以,中剂量组为本实验的最佳剂量组。
    血管性血友病因子vWF 是由血管内皮细胞和巨核细胞合成的一种糖蛋白, vWF 为一种高分子蛋白质, 在血中含量为5~10nm/ L。在内皮细胞受到刺激时释放至血浆, vWF 可与胶原等结合而发生构形改变, 导致血小板粘附。血浆vWF 升高可作为内皮细胞受损的标志。它可参于凝血促进血小板粘附和聚集, 诱发血栓形成。vWF是反映血管内皮受损的一个指标,对判断血栓形成的危险及病情轻重有重要的参考价值[15]。本实验测得正常对照组与血瘀模型组大鼠血浆vWF含量具有显著差异,说明实验动物造模成功。天欣泰血栓心脉宁片低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆vWF含量明显降低,其中中、高剂量组减低最为显著,效果与阳性对照组相似,说明天欣泰血栓心脉宁片对急性血瘀有良好的防治作用。
    本实验结果表明天欣泰血栓心脉宁片可有效降低血瘀模型大鼠的血浆GMP-140及vWF含量,对血栓形成具有良好的防治作用。
     
    参考文献
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